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    研域生物公司: 研究牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)的實驗原理

    發(fā)布時間: 2017-08-16  點擊次數(shù): 1132次

    牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)基中的中藥成份之一。在培養(yǎng)基中加入適量血清(10%),首先可以補(bǔ)充細(xì)胞生長所需的生長因子、激素、帖附因子等,其次它具有解毒作用,能解除脂肪酸、重金屬和某些蛋白酶的毒性;再次,它還能中止胰酶的作用,并保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷等。但是血清成分復(fù)雜,不同來源、不同批號生產(chǎn)的血清對細(xì)胞生長作用的差異較大。血清的保存期只有一年,不同存放時期的血清的效力也不同。所以,當(dāng)新購得的血清或要在開始一個重大試驗的時候,應(yīng)首先進(jìn)行牛血清的篩選。 篩選時,通常選用正常的二倍體細(xì)胞和不太好養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞,也可以使正要準(zhǔn)備培養(yǎng)的細(xì)胞。另外,用已知血清作對照。 

     

    儀器、材料和試劑 
    儀器 
    CO2 培養(yǎng)箱,超凈工作臺,微量加樣器,滅菌鍋 
    材料 
    96孔培養(yǎng)板,刻度吸管,移液管,試管,吸管,廢液缸,血球計數(shù)板,HeLa細(xì)胞,Mel細(xì)胞 
    試劑 
    DMEM,不同批號的血清,胰酶,雙抗 
     

    實驗步驟 
    1.取HeLa細(xì)胞和Mel細(xì)胞(本來應(yīng)該取正常的二倍體細(xì)胞和不太好養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞,但是實驗室條件有限,本組做HeLa細(xì)胞),胰酶消化后,用無血清培養(yǎng)基(事先加雙抗)吹打成細(xì)胞懸液(避免以前血清的干擾)。計數(shù)。 
    2.取4000個左右的HeLa細(xì)胞加入到每行的*孔(在加之前要震蕩培養(yǎng)基)。本實驗經(jīng)計數(shù)后應(yīng)加11μL細(xì)胞。 
    3.在A和H行中*孔加入89μL含標(biāo)準(zhǔn)血清(2004.12)的培養(yǎng)基。(對照組) 
    4.在A和H行中每一孔中加入100μL含標(biāo)準(zhǔn)血清的培養(yǎng)基。 
    5.將*孔中的液體吸100μL至第二孔,從第二孔吸100μL至第三孔,然后相同。zui后的100μL棄掉。這樣就形成了從*個孔到zui后一個孔的細(xì)胞梯度從大約2056,1028等至1個。(要吹細(xì)均勻) 
    6.每個孔再補(bǔ)加100μL含標(biāo)準(zhǔn)血清的培養(yǎng)基。這可以保證孔中的營養(yǎng)物質(zhì)。 
    7.在B行采取同樣的方法。白介素ELISA試劑盒不同的是用含有需篩選的批號為011217血清代替標(biāo)準(zhǔn)血清。 
    8.在C至G行采用同樣的方法。血清批號分別是030224,040528,040830,041012,041016。 
    9.將96孔培養(yǎng)板放入CO2 培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)一周。 
    10. 培養(yǎng)結(jié)束后,觀察細(xì)胞生長的情況。比較在同一細(xì)胞濃度下的不同學(xué)清對細(xì)胞生長的影響。在同一細(xì)胞濃度下細(xì)胞生長數(shù)zui多的培養(yǎng)基所含有的血清即可作為被選擇的血清樣品。 

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