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    elisa試劑盒主要設(shè)備

    發(fā)布時間: 2014-12-19  點(diǎn)擊次數(shù): 904次

    elisa試劑盒試劑
    (1) 包被緩沖液(PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液):
    Na2CO3 1.59克
    NaHCO3 2.93克
    加蒸餾水至1000ml
    (2) 洗滌緩沖液(PH7.4PBS):0.15M
    KH2PO4 0.2克
    Na2HPO4·12H2O 2.9克
    NaCl 8.0克
    KCl 0.2克
    Tween-20 0.05% 0.5ml
    加蒸餾水至1000ml
    (3) 稀釋液:
    牛血清白蛋白(BSA) 0.1克
    加洗滌緩沖液至100ml
    或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5~10%使用。
    (4) 終止液(3M H2SO4):
    蒸餾水178.3ml,逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。
    (5) 底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):
    0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml
    0.1M檸檬酸(19.2克/L) 24.3ml
    加蒸餾水50ml。
    (6) TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液:
    TMB(10mg/5ml無水乙醇)0.5ml
    底物緩沖液(PH5.5) 10ml
    0.75%H2O2 32μl
    (7) ABTS使用液:
    ABTS 0.5mg
    底物緩沖液(PH5.5) 1ml
    3%H2O2 2μl
    (8) 抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體。
    (9) 正常人血清和陽性對照血清。
    器材
    (1) 聚苯乙烯塑料板(簡稱酶標(biāo)板)40孔或96孔,ELISA檢測儀,50μl及100μl加樣器,塑料滴頭,小毛巾,洗滌瓶。
    (2) 小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。
    (3) 4℃冰箱,37℃孵育箱。
    elisa試劑盒試驗(yàn)原理
    試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。
    自備材料
    1. 蒸餾水。
    2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
    3. 振蕩器及磁力攪拌器等。
    elisa試劑盒安全性
    1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
    2. 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
    3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
    4. 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
    5. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
    6. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
    7. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
    8. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
    9. 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
    10. 底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
    11. 加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
    12. 按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

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